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高通量測序原理及技術(shù)應(yīng)用

時間 : 2024-11-25     

說到高通量測序,相信很多人都跟小編一樣都不是特別的了解。今天大家就跟著小編一起來認(rèn)識一下高通量測序技術(shù)原理以及它的應(yīng)用。高通量測序又被人們稱作下一代的測序技術(shù)和深度測序,它能夠一次對幾十萬甚至幾百萬的DNA分子進(jìn)行序列測定和一般來說的讀長較短等這些標(biāo)志,這也使得它對一個物種的轉(zhuǎn)錄和基因的分析有了一個全新的面貌。

高通量測序

一、原理

目前,所說的高通量測序技術(shù)主要是指454 Life science公司、ABI公司和Illumian公司推出的第二代測序技術(shù)以及Helicos Heliscope TM和Pacific Biosciences推出的單分子測序技術(shù)。相對于傳統(tǒng)測序的96道毛細(xì)管測序,高通量測序一次實(shí)驗可以讀取40萬到400萬條序列。讀取長度根據(jù)平臺不同從25bp到450bp,不同的測序平臺在一次實(shí)驗中,可以讀取1G到14G不等的堿基數(shù),這樣龐大的測序能力是傳統(tǒng)測序儀所不能比擬的。

二、技術(shù)應(yīng)用

測序技術(shù)推進(jìn)科學(xué)研究的發(fā)展。隨著第二代測序技術(shù)的迅猛發(fā)展,科學(xué)界也開始越來越多地應(yīng)用第二代測序技術(shù)來解決生物學(xué)問題。比如在基因組水平上對還沒有參考序列的物種進(jìn)行從頭測序,獲得該物種的參考序列,為后續(xù)研究和分子育種奠定基礎(chǔ);對有參考序列的物種,進(jìn)行全基因組重測序,在全基因組水平上掃描并檢測突變位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)個體差異的分子基礎(chǔ)。在轉(zhuǎn)錄組水平上進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測序,從而開展可變剪接、編碼序列單核苷酸多態(tài)性等研究;或者進(jìn)行小分子RNA測序,通過分離特定大小的RNA分子進(jìn)行測序,從而發(fā)現(xiàn)新的microRNA分子。在轉(zhuǎn)錄組水平上,與染色質(zhì)免疫共沉淀和甲基化DNA免疫共沉淀技術(shù)相結(jié)合,從而檢測出與特定轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的DNA區(qū)域和基因組上的甲基化位點(diǎn)。

這邊需要特別指出的是第二代測序結(jié)合微陣列技術(shù)而衍生出來的應(yīng)用--目標(biāo)序列捕獲測序技術(shù)(Targeted Resequencing)。這項技術(shù)首先利用微陣列技術(shù)合成大量寡核苷酸探針,這些寡核苷酸探針能夠與基因組上的特定區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合,從而富集到特定區(qū)段,然后用第二代測序技術(shù)對這些區(qū)段進(jìn)行測序。目前提供序列捕獲的廠家有Agilent和Nimblegen,應(yīng)用最多的是人全外顯子組捕獲測序??茖W(xué)家們目前認(rèn)為外顯子組測序比全基因組重測序更有優(yōu)勢,不僅僅是費(fèi)用較低,更是因為外顯子組測序的數(shù)據(jù)分析計算量較小,與生物學(xué)表型結(jié)合更為直接。

高通量測序技術(shù)的出現(xiàn)可以說是基因研究領(lǐng)域中一個十分具有意義的事件,高通量測序相對于前幾代的測序相比來說,有了相當(dāng)大的進(jìn)步,并且在價格上也得到了相當(dāng)大的改善。高通量測序技術(shù)以低廉的測序成本實(shí)施了對更多其他物種的基因密碼的獲取。相信在未來的發(fā)展中,高通量測序技術(shù)只會越來越的完善。小編今天的介紹就到這里了,希望可以為大家?guī)硪欢ǖ膸椭?/p>

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